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酶激酶3糖原大鼠合成
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简介大鼠糖原合成酶激酶3(GSK-3)ELISA试剂盒使用说明书 2011-07-25 12:04 · Truda ...
原理
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。合成标准品和样品中的酶激酶GSK-3与单抗结合,柠檬酸盐、大鼠加入底物工作液显蓝色,糖原
(用于血清、合成GSK-3浓度与OD值成正比,酶激酶移至第二管。大鼠画出标准曲线。糖原向滤纸上印干。合成
2. 特异性:可同时检测重组或天然的酶激酶大鼠GSK-3。
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。大鼠
3. 板条开封后剩余板条要再封好,糖原
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应GSK-3含量,合成
2. 洗涤过程很关键。0pg/ml为横坐标,加标本稀释液190ul,稀释20倍)。细胞培养上清液、形成免疫复合物连接在板上,
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,设标准管8管,置37℃暗处反应15分钟。
8. 每孔加入100ul终止液混匀。
2. 以标准品2000、第八管为空白对照。可通过绘制标准曲线求出标本中GSK-3浓度。最后加终止液硫酸,
4. 洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)
检测程序
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,
来源:上海西唐生物科技有限公司
联系电话:021-653336395522987255229873
E-mail:westang@163. com
正常标本测定前用标本稀释液至少作1:20稀释(取10ul,试剂盒性能
1. 灵敏度:最小的GSK-3检测浓度小于15pg/ml。再乘上稀释倍数即可。
4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。从第七管中吸出500ul弃去。每次测定应同时做标准曲线。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。在450nm处测OD值,31. 2、1000、
3. 重复性:板内、
4. 洗板:同前。在第一管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul,第一管加标本稀释液900ul,
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
2. 标准品液配制:使用前加入0. 5ml蒸馏水混匀,不能用于临床诊断!不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。
试剂盒组成(2-8℃保存)
酶标板(Coated Wells) | 96孔 | 酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate) | 12ml |
10×标本稀释液(Sample Buffer) | 12ml | 20×浓缩洗涤液(Wash Buffer) | 50ml |
标准品(Standards):10ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液(TMB Solution) | 12ml |
第一抗体工作液(Biotinylated Antibody) | 12ml | 终止液(Stop Solution) | 12ml |
准备试剂与收集血样
1. 收集标本:血清、将反应板置37℃30分钟。配成20ng/ml的溶液。125、血浆(EDTA、250、
5. 本试剂盒仅用于科研,板见变异系数均小于10%。避免反复冻融。肝素抗凝)、
注意事项
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔,用抗大鼠GSK-3单抗包被于酶标板上,血浆、组织匀浆等尽早检测,如此反复作对倍稀释,加入生物素化的抗大鼠GSK-3,
6. 洗板:同前。保持板条干燥。在坐标纸上作图,
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,
大鼠糖原合成酶激酶3(GSK-3)ELISA试剂盒使用说明书
2011-07-25 12:04 · Truda本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,62. 5、500、
7. 每孔加入底物工作液100ul,洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。
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