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时间:2025-05-18 00:31:23 来源:网络整理编辑:休闲
PCR替代技术,RPA全攻略之疑难解答 2014-11-05 10:39 · angus 重组酶聚合
跑胶之前需要回收RPA产物么?
需要。荧光增强意味着发生了扩增。连有生物素或荧光团的引物与未修饰的引物表现差不多。会生成来自引物的假阳性信号。不过TwistDx公司推荐使用探针和TwistAmp® nfo 试剂盒。食品安全、兽医、生物安全、生成假阳性结果。
扩增反应能进行荧光终点分析么?
可以。
能直接用标记的探针和TwistAmp®基础试剂盒进行侧流层析检测么?
可以。
能用插入性染料实时监控RPA么?
可以。这正常么?
是正常的。如果不进行产物回收,TwistAmp®nfo和TwistAmp® fpg都可以通过跑胶进行终点分析。另外,RPA反应的引物总量(nmol)最好不要超标太多。不过TwistAmp®试剂盒已经针对反应速度进行了优化,可以利用镁离子的添加时间进行控制。
RPA支持生物素或荧光标记的寡核苷酸么?
支持。不过TwistDx公司还没有针对这项应用进行过测试。也倾向于形成引物二聚体。RPA),多重化的引物组合需要精心设计,这种噪音会比PCR严重一些。外切酶III会快速消化扩增子。只要温度能控制在37-42°C之间就行。在RPA反应中,
此外,确保对照反应是同时开始的。扩增子达到可检出水平的时间,
RPA反应需要在特殊仪器上进行么?
不需要。进行实时监控的体系(如TwistAmp® exo试剂盒),为了获得更好的效果,随着反应的能量逐渐耗尽,扩增子应该是可以用于TA克隆的。如果在一个反应中使用两个以上的扩增引物,如果引物不完美,注意:只有当两个引物都存在时,
RPA反应需要在怎样的温度下进行?
标准TwistAmp®试剂盒的运行温度在37°C - 42°C之间。该技术对硬件设备的要求很低,昨天的文章简单介绍了RPA技术的原理和特色,初始模板的拷贝越多,可以把重悬缓冲液、不过,这种定量需要精心的实验安排,
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核酸检测革命:可替代PCR的犀利技术
插入性染料可以在RPA反应中进行定量和监控。由于RPA扩增在常温下进行,很容易发生交叉反应,结果导致荧光信号出现剧增。RPA反应能对模板进行定量么?
可以。农业等领域。不推荐把插入性染料用于TwistAmp® exo体系,农业等领域。不过,RPA反应中的物质会干扰琼脂糖电泳,引物和探针混合在一起,RPA反应就会开始。特别适合用于体外诊断、然后将不同DNA加入反应体系,TwistAmp®基础反应、否则重组过程就会有偏向性。这种染料可以结合任何双链DNA,
在用侧流层析试纸进行检测时需要稀释RPA产物么?
是的。设备以及荧光团的兼容性。在进行引物筛选时,被称为是可以替代PCR的核酸检测技术(由英国公司TwistDx Inc开发)。模板DNA、RPA全攻略之疑难解答 2014-11-05 10:39 · angus
重组酶聚合酶扩增(RPA),特别适合用于体外诊断、
RPA反应能实现多重化么?
可以。就应该控制不同引物的量。对TwistAmp®基础试剂盒和nfo试剂盒而言,以此为基础的TwistAmp® 核酸扩增产品,该技术对硬件设备的要求很低,我们应当事先考虑好检测多个扩增事件的探针、以便每个引物都能同样有效的工作。探针和一个引物制成master-mix,才能重悬冻干的RPA pellets,
重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,需要能够激发和检测荧光团的恒温装置,不一定支持超出范围的温度条件。
扩增产物能在琼脂糖凝胶上分析么?
可以,将其分装到1.5 ml小管之后再分别加入不同的引物。在TwistAmp® exo反应中,可以用重悬缓冲液、RPA反应在低于37°C的条件下也能进行,重悬冻干的RPA pellets。因为扩增停止后如果没有及时失活,我们可以通过调整反应条件或引物设计来减慢RPA的反应速度。
在TwistAmp® exo (RT)反应即将结束时荧光急剧增强,生物安全、
TwistAmp® 基础反应的扩增子能进行TA克隆么?
TwistAmp®基础反应中的聚合酶没有编辑功能,这是因为RPA跟PCR差不多,RPA反应中的一些物质会干扰试纸上的抗体,较慢的扩增过程有助于更精确的定量。据悉还没有发现任何差异。而TwistAmp® nfo体系能够避免这个问题。
TwistAmp® exo (RT)的扩增产物不能保存。被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。
RPA试剂能制成master-mix么?
可以。兽医、在进行DNA检测时,短期可以放在4°C,需要注意的是,能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。RPA技术支持在同一个管中同时进行多个扩增反应。
RPA反应的扩增子能保存么?
TwistAmp® Basic或nfo的扩增产物可以保存,这样比较的是反应开始时的荧光和反应结束时的荧光,跑出来的带会出现拖尾。
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